Kv1.5高通量分析
High-throughput analysis of drug binding interactions for the human cardiac channel, Kv1.5
电压门控钾通道Kv1.5是人心房肌细胞膜电位复极化的关键调控因子之一，被认为是治疗心房纤颤的潜在药物靶点。在本研究中，我们试图确定DPO-1的作用分子机制，这是一种二苯基氧化膦衍生物，最近被证明可以在不影响心室不应期的情况下终止实验性房性心律失常。此外，我们还对另外两种不同的小分子阻断剂做了类似的分析，它们代表了不同的结构类别：环己酮(PAC)和非三萜（珊瑚内酯）。为了快速识别Kv1.5通道中对阻断这些分子活性至关重要的残基，我们采用了两种功能性高通量离子通道分析和定点诱变方法。我们的研究表明，阻断DPO-1活性的重要残基包括位于孔外口的T480，以及沿S6螺旋的两个残基：V505和I508。在PAC中存在重叠位点，包括T480和V505残基。与DPO-1相比，I508A突变仅导致PAC对Kv1.5阻断的适度减少（9倍）。珊瑚内酯是被检测的分子量最大的分子，在整个孔长(从T480到V516)上进行了广泛的相互作用。总之，我们已经鉴定了多个参与形成Kv1.5阻断剂高亲和力结合位点的残基。高通量离子通道技术的类似方法，结合定点诱变，可以平行、快速和准确地分析离子通道与多种化合物的相互作用，并有助于设计更有效和更具有选择性的离子通道阻滞剂。
仪器方法：离子通道阅读器ICR 8100/ICR 12000
