非放射性铷离子分析测定Na+ , K- ATPase
Development of an HTS Assay for Na+ , K- ATPase Using Nonradioactive Rubidium Ion Uptake
本文通过Na+ , K– ATPase通道的高通量筛选(HTS)方法，以研究铷吸收作为该通道功能活性和调节的测量。该测定方法使用元素铷作为K离子的示踪剂。使用3个细胞系来研究通道，用96孔板进行检测。在37°C下，Rb进入CHO-K1细胞；在含有5.4mM RbCl的培养基中，孵育80min离子内流量最大。细胞分别在Rb缓冲液(5.4mM)和泵阻断剂乌本苷中孵育1、2和3h。在所有三个时间间隔内，用浓度为5mM的瓦巴因观察到Rb内流的被完全阻断。孵育3h后，CHO-K1细胞系ATPase的50%抑制浓度（IC50）值为298μM。此外，在孵育30min时，观察到的半抑制浓度值分别为94和89μM，表明该方案具有可重复性的结果。这些研究扩展了Na+ , K– ATPase的药理特性，并证明了该HTS检测系统筛选药物调节Na+ , K– ATPase功能的化合物的可行性。
仪器方法：离子通道阅读器ICR 8100/ICR 12000
